MN9D小鼠中腦多巴胺能神經元細胞培養操作步驟

細胞培養操作步驟：

1.吸走多余培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；

2.吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰-酶浸沒細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；

（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3.加入6-8ml*培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4.將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

注意事項：不同品牌胰-酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。