細胞培養操作步驟

細胞培養操作步驟：（供參考）

吸走多余培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；

吸干凈PBS后加入1mL0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

加入6-8ml培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養(建議T25瓶加10-12ml培養基，10cm皿加12-15ml)；傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1：3-1：4傳代，生長較慢的細胞可以1：2傳代。

細胞冷凍保存：

1.凍存液：92%培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）。

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。