總巰基測定試劑盒說明書

總巰基測定試劑盒說明書

分光光度法  50 管/24 樣注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

生物體內巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質， 而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和 GSH 含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。

測定原理

巰基基團與 5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在 412nm 處有最大吸收峰。

自備實驗用品

天平、研缽、可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備

（1）   動物、植物組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。

（2）   血清，培養液：直接測定。

操作步驟