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支鏈淀粉含量試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/4/10點(diǎn)擊次數(shù):470

支鏈淀粉含量試劑盒說明書

                                  微量法100/96

  意 :正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

支鏈淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對淀粉產(chǎn)品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響,對于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。

測定原理:

利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,利用雙波長比色法測定支鏈淀粉含量。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、yi醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑二:yi醚100mL×1瓶;4℃保存;(自備)

試劑三:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑四:液體2mL×1; 4℃保存;

試劑五:液體300uL×1; 4℃保存;

淀粉提?。?/span>

稱取0.01~0.02g烘干樣本(建議稱取約0.01g)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑二(yi醚)振蕩5min,3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑三充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后待測。

測定步驟:

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,蒸餾水調(diào)零。

測定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL樣本, 14uL試劑四,120uL蒸餾水,2uL試劑五,44uL蒸餾水,混勻,分別測定550743nm處吸光值,ΔA測定=A550-A743。

空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL試劑三, 14uL試劑四,120uL蒸餾水,2uL試劑五,44uL蒸餾水,混勻,分別測定550743nm處吸光值,ΔA空白=A550-A743。

支鏈淀粉含量計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.1214x+0.0076x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL,y吸光。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

支鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

b. 96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y= 0.0607x+0.0076x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mLy吸光。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

支鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g

z低檢測限為10mg/g干重或0.1mg/mgprot。


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