優利科(上海)生命科學有限公司 · 品質創造價值 服務成就未來!
服務熱線:15021281375
DOWNLOAD

資料下載

當前位置:首頁資料下載磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )試劑盒說明書

磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )試劑盒說明書

發布時間:2023/5/12點擊次數:641

磷脂酶C Phospholipases CPLC )試劑盒說明書

 微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

磷脂酶CEC3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發育等方面具有重要作用。

 

測定原理:

磷脂酶C催化水解NPPC產生對硝基苯酚,在410nm處有特征吸收峰。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標儀微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體102mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。

 

酶液提取:

1.        組織:按照質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

2.        細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

3.        血清:直接測定。                  

 

測定操作:

 


空白管

測定管

樣品(μL


20

試劑一(μL

20


試劑二(μL

100

100

充分混勻,37℃反應30min

試劑三(μL

80

80

充分混勻,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定410nm處吸光值,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管。

 

 

酶活計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.0191x - 0.0103R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot=A+0.0103÷ 0.0191×V反總÷(V×Cpr) ÷T = 17.45×A+0.0103÷ Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義:每克組織每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=A+0.0103÷ 0.0191×V反總÷(V÷V樣總×W) ÷T

                          = 17.45×A+0.0103÷ W

3.按照細胞數量計算

酶活性定義:104個細胞每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell=A+0.0103÷ 0.0191×V反總÷(V÷V樣總×細胞數量) ÷T

                          = 17.45×A+0.0103÷ 細胞數量

4.按照液體體積計算

酶活性定義:每毫升血清每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL= A+0.0103÷ 0.0191×V反總÷V÷T

                       = 17.45×A+0.0103

V反總:反應總體積,0.2mLV樣:加入樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質量,gT:反應時間,30min

 

 

b.       96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.0095x - 0.0103R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot=A+0.0103÷ 0.0095×V反總÷(V×Cpr) ÷T

                           = 35.09×A+0.0103÷ Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義:每克組織每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=A+0.0103÷ 0.0095×V反總÷(V÷V樣總×W) ÷T

                          = 35.09×A+0.0103÷ W

3.按照細胞數量計算

酶活性定義:104個細胞每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell=A+0.0103÷ 0.0095×V反總÷(V÷V樣總×細胞數量) ÷T

                    =35.09×A+0.0103÷ 細胞數量

4.按照液體體積計算

酶活性定義:每毫升血清每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL= A+0.0103÷ 0.0095×V反總÷V÷T

                    = 35.09×A+0.0103

V反總:反應總體積,0.2mLV樣:加入樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質量,gT:反應時間,30min

文件下載    圖片下載    
聯系我們
掃碼加微信 移動端瀏覽
Copyright © 2025優利科(上海)生命科學有限公司 All Rights Reserved    備案號:滬ICP備2022019216號-1
技術支持:化工儀器網    管理登錄    sitemap.xml
主站蜘蛛池模板: 第一福利官方导航| japonensisjava野外vt| 草莓视频未满十八岁| 日本精品卡一卡2卡三卡| 国产在线视频网| 久草福利资源在线观看| 成人观看网站a| 日韩三级一区二区| 国产亚洲情侣一区二区无| 久久久久久亚洲精品| 色偷偷亚洲第一综合网| 成年女人免费v片| 别揉我胸啊嗯动漫网站| 一本大道一卡二大卡三卡免费| 精品国产91久久久久久久a| 婷婷社区五月天| 亚洲视频在线观看| 8av国产精品爽爽ⅴa在线观看| 欧美午夜视频在线观看| 国产欧美一区二区三区久久| 久久精品国产亚洲精品2020| 菠萝菠萝蜜在线免费视频| 我和娇妻乱荡史| 免费人妻无码不卡中文字幕系| AV无码精品一区二区三区宅噜噜| 波多野结衣一区| 日韩欧美中文字幕在线视频| 国产国语一级毛片在线视频| 久久久久久久久人体| 精品伊人久久大线蕉色首页| 天天爽夜夜爽夜夜爽精品视频| 亚洲欧美日韩在线观看| 欧美深夜福利视频| 日本不卡1卡2卡三卡四卡最新| 制服丝袜中文字幕在线| 97人人模人人爽人人喊6| 欧美亚洲视频一区| 国产三级精品三级男人的天堂| 一级毛片视频在线观看| 欧美色图亚洲图片| 国产成人亚洲综合一区|