優利科(上海)生命科學有限公司 · 品質創造價值 服務成就未來!
服務熱線:15021281375
DOWNLOAD

資料下載

當前位置:首頁資料下載甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase,MCS)試劑盒說明書

甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase,MCS)試劑盒說明書

發布時間:2023/6/11點擊次數:506

甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthaseMCS)試劑盒說明書

                                         微量法100/96

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環的調節。

 

測定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產生甲基檸檬酰輔酶A,進一步水解產生甲基檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,-20保存;

試劑二:液體20mL×1瓶,-20保存;

試劑三:液體1.5mL×1支,-20保存;

試劑四:液體30mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1瓶,4保存;

試劑六:粉劑×1支,-20保存,臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

 

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

        稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

        將勻漿600g4離心5min

        棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4離心10min

        上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。

        在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體CS測定。

 

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

1)在試劑五中加入1mL無水乙醇和22mL試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融

2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑五和10μL試劑六,混勻,記錄412nm20秒時的初始吸光度A1220秒時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1

 

MCS活性計算:

a.        使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W× V÷V樣總)÷T=177.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=0.3556×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 LεTNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應時間,2 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

 

b.       使用96孔板測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1760×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W ×V÷V樣總)÷T=355.6×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min /104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=0.711×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 LεTNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應時間,2 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

 

配方

試劑一:液體100mL×1瓶,4保存;(50mM Tris-HCl 7.48.56g 蔗糖,88mg EDTA

試劑二:液體20mL×1瓶,4保存;(10mM Tris-HCl 7.41Trixton-100)

試劑三:液體1.5mL×1支,4保存;(100mM PMSF)

試劑四:液體×1瓶,4保存;(稱0.135g Tris0.166g KCl8.4mgEDTA,溶于27.5mL雙蒸水,用HCl調pH7.5

試劑五:粉劑×1瓶,4保存;(稱取2mg DTNB2mg 丙二酰CoA30mL試劑瓶)

試劑六:粉劑×1支,-20保存;(稱取0.6mg草酰乙酸于1.5mLEP管)

文件下載    圖片下載    
聯系我們
掃碼加微信 移動端瀏覽
Copyright © 2025優利科(上海)生命科學有限公司 All Rights Reserved    備案號:滬ICP備2022019216號-1
技術支持:化工儀器網    管理登錄    sitemap.xml
主站蜘蛛池模板: 暖暖在线日本免费中文| 麻豆网神马久久人鬼片| 高级秘密俱乐部的娇妻| 欧洲多毛裸体xxxxx| 天天综合亚洲色在线精品| 国产在线一卡二卡| 久久国产综合精品欧美| 91在线国内在线播放老师| 污污的软件下载| 国产高清美女一级毛片图片| 亚洲欧美日韩综合久久久久| 91久久青青草原线免费| 欧美交性a视频免费| 国产片**aa毛片视频| 久久精品一区二区国产| 香蕉免费看一区二区三区| 欢愉电影完整版免费观看中字| 国语对白做受XXXXX在线中国| 亚洲永久精品ww47| a级韩国乱理论片在线观看| 特黄大片又粗又大又暴| 差差漫画页面登录在线看| 你懂得的在线观看免费视频| 99热热久久这里只有精品166| 欧美特黄一免在线观看| 国产精品12页| 久久久久久亚洲精品中文字幕| 美女的尿口免费| 无翼少无翼恶女漫画全彩app| 啊灬啊别停老师灬用力啊视频| kk4kk免费视频毛片| 欧美黑人巨大xxxxxxxx| 国产激情电影综合在线看| 久久久免费的精品| 精品一区二区三区在线播放视频 | 热re99久久精品国产99热| 国产自产21区| 久久精品欧美日韩精品| 美女扒了内裤让男人桶爽视频| 天下第一社区视频在线观看www| 亚洲国产精品成人综合色在线婷婷|