Kasumi-1 人紅白血病細胞培養說明書

人紅白血病細胞

（KASUMI-1）

細胞介紹

人急性髓母白血病細胞，該細胞復蘇后需要兩周左右恢復正常生長。

STR結果如下：D5S818: 9,11；D13S317: 11,13；D7S820: 8,11；D16S539: 9,12；vWA: 14；THO1: 6,9；Amelogenin: X；TPOX: 8,9；CSF1PO: 10,12

細胞特性

1）  來源：紅白血病細胞，

2）  形態：原粒細胞，懸浮生長

3）  含量：>1x10⁶ 細胞數

4）  規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

    5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完培）。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基；優質胎牛血清，20%；GlutaMAX-1谷氨酰胺1%，Sodium Pyruvate丙酮酸鈉1%，雙抗，1%。

  注意事項：
a) 該細胞復蘇后成活率較低，會出現大量死細胞和死細胞碎片，培養兩周后有所好轉。建議每1-2周對細胞進行1000rpm, 5mins離心，棄掉上清，加入新鮮完培養液，可以去掉部分細胞碎片和顆粒。培養過程中會出現死細胞和細胞碎片，收到郵寄的活細胞的用戶若發現培養物內有部分死細胞和細胞碎片，此為正?，F象。
b) 細胞培養過程中會有輕微聚團，輕輕吹打開即可。當細胞密度較大或者培養液變黃時，需要及時進行半換液或者完換液。
c) 該細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口品牌優質血清進行培養。
d) 請注意保持細胞密度在合適的范圍（3x105 ~ 3x106 /ml），不能過稀。

2)培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3)  凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1）  凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）  細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完培來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完培以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）  細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。