土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測定試劑盒說明書

                                                    微量法100T/48S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價值。

測定原理：

S-β-XYS催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算S-β-XYS活性。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

約0.1g鮮土或風干土樣，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測。

測定操作表：

1、   分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至405nm。

2、   操作表

β-木糖苷酶活性計算公式：

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。

酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.12mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min=1/72d；

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA

酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.12mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min=1/72d；

ΔA控制在0.01-1范圍內(nèi)，若ΔA大于1，可適當減小樣本量。

標準曲線線性范圍為：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。