植物淀粉含量試劑盒說明書

植物淀粉含量試劑盒說明書

                                     微量法100管/96樣

注    意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

淀粉是植物中糖的主要儲存形式，其含量測定對于評價食品營養價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。

測定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量，即可計算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體105mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；

淀粉提取：

1、   稱取0.1~0.2g新鮮樣本（建議稱取約0.1g新鮮樣本）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀。

2、   沉淀中加入0.5mL蒸餾水，放入95℃水浴中糊化15min（蓋緊，以防止水分散失）。

3、   冷卻后，加入0.35mL試劑二，25℃常溫提取15min，振蕩3-5次。

4、   加入0.85mL蒸餾水，混勻，3000g，25℃離心10min，取上清液待測。

注意：如樣本為淀粉含量較高的干樣，為保證充分提取，可適當減小取樣量，如稱取0.01g~0.02g干樣，加入1mL試劑一，其余提取步驟同上。

測定步驟：

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至620nm，蒸餾水調零。

2、   調節水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入3.75mL蒸餾水后，緩慢加入21.25mL濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑4℃保存一周；

4、樣本測定：取50μL樣本和250μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A。

淀粉含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 5.872x - 0.0295；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 2.936x - 0.0295；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意：由于工作液具有強腐蝕性，請謹慎操作。

      若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計算公式中乘以相應的稀釋倍數。

提取液的配置：0.35mL試劑二+1.35mL水。用多少按照此比例配多少。

Z低檢測限為10μg/g鮮重或100ng/mgprot。