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游離脂肪酸(FFA)含量試劑盒(測植物組織)

發布時間:2023/5/17點擊次數:441

游離脂肪酸(FFA)含量試劑盒(測植物組織)

                                               微量法100T/48S

 

 

   正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

FFA既是脂肪水解的產物,又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌功能有關,也可反映食物貯藏中的品質變化。

 

測定原理:

在弱酸性條件下,FFA與銅鹽反應生成銅皂,在715nm處有特征吸收峰,在一定范圍內游離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關系。

 

自備儀器和用品:

研缽、臺式離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,4保存。

試劑三:液體20mL×1瓶,4保存。

 

樣品中FFA提取:

組織用蒸餾水沖洗干凈后,用吸水紙吸取表面水分,搗碎后按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,震蕩提取3h8000g4離心10min,取上清液待測。

 

測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到715 nm

2. 對照管:取上清液0.4mL,加0.2mL試劑二,充分震蕩5min,室溫靜置5min,取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板,調零。

3. 測定管:取上清液0.4mL,加0.2mL試劑三,充分震蕩5min,室溫靜置5min,取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板,測定吸光值,記為A

 

FFA含量計算:

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.0075 x+ 0.0055R2=0.994

1)按樣本蛋白濃度計算

FFAnmol/mg prot= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

2按樣本質量計算

FFAnmol/g 鮮重= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W

 

V1加入樣本體積,0.4mLV2:提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,g

 

b.使用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.0038 x+ 0.0055R2=0.994

1)按樣本蛋白濃度計算

FFAnmol/mg prot= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr

2)按樣本質量計算

FFAnmol/g 鮮重= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W

V1加入樣本體積,0.4mLV2:提取液體積,1mL Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,g

 

注意事項:

1.        蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定,可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測定試劑盒。

2.        Z低檢出限為2 nmol/mL

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